本文標(biāo)題："熒光顯微鏡物鏡的光圈(NA)和激發(fā)光的波長技術(shù)"
發(fā)布者：yiyi ------ 分類: 行業(yè)動(dòng)態(tài) ------
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熒光顯微鏡物鏡的光圈(NA)和激發(fā)光的波長技術(shù)
如果最早一次的成像可行，那么在以后所有的GFP時(shí)延性實(shí)驗(yàn)中
，采用已經(jīng)摸索出的設(shè)備參數(shù)，如掃描時(shí)間，激發(fā)水平和檢波器的
捕獲和篩檢，保持成像的一致性，或至少可以作為一個(gè)良好的起點(diǎn)
。8．設(shè)置圖像理想的像素大小。許多設(shè)備有可選擇的范圍(64像素
×64像素～2048像素×2048像素)。通常，每平方微米的像素越多
，影像就越清晰；然而，這些高像素的影像在同樣的像素設(shè)置時(shí)間
中需要更長時(shí)問的掃描，并且需要更多的儲(chǔ)存空間。記住為了使數(shù)
碼影像保持空問分辨率，應(yīng)該調(diào)整像素的大小到每個(gè)可分解單元≥
2個(gè)像素。可分解單元(r)取決于物鏡的光圈(NA)和激發(fā)光的波長Q)
(r—o．61xz／NA)。9．為每個(gè)影像設(shè)置理想的掃描時(shí)間。像前面
提到的，研究進(jìn)程的相對(duì)速度在一定程度上決定掃描時(shí)間。通過改
變像素設(shè)置時(shí)間(每個(gè)像素收集熒光的時(shí)間)改變總的掃描時(shí)間或者
平均一個(gè)像素所需要的時(shí)間(多次影像掃描后，單個(gè)像素收集的總
熒光除以掃描次數(shù))。簡單地說，改變掃描時(shí)間在本例中不會(huì)引起
差別。然而，如果使用平均像素，則應(yīng)考慮到與畫面平均(重復(fù)掃
描整張影像)相對(duì)的線平均(用平均的像素重復(fù)掃描單一的像素線，
進(jìn)行平均)與平均畫面。在活細(xì)胞中，熒光標(biāo)記的蛋白質(zhì)可能正在
細(xì)胞中運(yùn)動(dòng)，而且平均畫面像素經(jīng)過掃描一整張影像所需要的時(shí)間
在不同的時(shí)間點(diǎn)被收集。這樣將會(huì)使熒光信號(hào)在比平常更大的范圍
內(nèi)丟失。
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