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本文標題:"顯微鏡帶有自動照像設備-圖像型科研儀器"

發布者:yiyi ------ 分類: 行業動態 ------ 人瀏覽過-----時間:2017-7-11 0:41:24

 顯微鏡帶有自動照像設備-圖像型科研儀器

 
     在觀察過程中熒光會有所減弱,當然如果將材料浸人抗減退
試課劑,如Vectashield,可以大大減少這種熒光的減弱。因此盡
快地拍攝記錄下圖像是十分重要的。由于用于激發DAPI的高能量的
短波長光,例如近UV/紫色,要比用于顯示德克薩斯紅和羅丹明的
較低能量的長波長光更快地使熒光染料漂白,因此建議首先拍攝紅
色熒光信號然后再拍攝綠色熒光,最后是藍色熒光圖像。拍攝ISH
熒光可能比較困難,因為通常熒光信號僅占圖像框的一小部分,并
且背景黑暗。如果顯微鏡帶有自動照像設備,它是根據整個拍攝視
野的光來計算曝光的,取的是熒光和周圍黑暗區域的平均值。因此
會使照片曝光過度。使用點測量設備或者在照相機上的暗視野設置
,或是手動控制曝光時間,這個問題即可迎刃而解。還有一種辦法
,即在預期曝光設置以下至少選兩個設置曝光。對于明亮的ISH信
號,其曝光時間大概在10-30s左右。對于較弱的信號,例如低拷貝
探針的信號,可能曝光時間要達到5min。DAPI圖像通常比ISH信號
亮得多,則僅要曝光數秒即可。·
    ·陽性對照  陽性對照是用來證明所使用的變性、雜交及檢測
試劑均反應正常。
    如果陽性對照反應正常而試驗的載玻片卻失敗,就表明試驗用
的探針有問題,
    并非是ISH反應本身的問題。陽性對照包括那些靶序列已知在
試驗材料中以
    多拷貝存在的探針,如核糖體DNA探針。
    ·陰性對照
    ——用來確定非特異性標記的程度。不使用任何探針或者用一
個在試驗材料中
    不存在的不相干的探針,或者用未標記的目的DNA序列進行實
    ——用來確定探針雜交的特異性。在不同的嚴緊性條件下進行
實驗。
    隨著嚴緊性的增加,雜交位點的數量會減少。在較高的嚴緊性
條件下,留下
    的只有那些與目的序列相對應的特異的雜交位點疑難解答
    由于ISH的時間較長,步驟較多,不可避免地會產生很多問題
 

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