本文標(biāo)題："固相萃取(SPE)是-種非常重要的樣品制備技術(shù)"
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固相萃取(SPE)是-種非常重要的樣品制備技術(shù)
固相萃取法
固相萃取法(SPE)是-種非常重要的樣品前處理技術(shù)，具有高度
自動化、高回收率和卓越選擇性等特點，商品化的小型固相萃取設(shè)
備和廣泛選擇性的吸附材料增加了固相萃取法的吸引力，固相萃取
的主要優(yōu)點是幾r在加入較少量溶劑的情況下同時對多個樣本進(jìn)行
提取從原理來說，固相萃取也是一種色譜技術(shù)，被分析物選擇性吸
附于吸附劑上，而不能吸附的物質(zhì)流出二先用清洗劑去除雜質(zhì)(如
苯酚一氯仿可從核酸混合物中將蛋白洗脫出來)，同時保留目標(biāo)分
析物，再使用另一種洗脫液(如Tris—EDTA緩沖液)回收核酸。原則
上，高效液相色譜、陰離子交換色譜以及SEC中所用的吸附劑均可
用于固相萃取。固相萃取儀器配有30～100μm較大孔徑的吸附劑，
以及較短的柱長．因此需要的壓力較小。通常，吸附劑是比較純的
二氧化硅，不含可與DNA結(jié)合的金屬化合物；
傳統(tǒng)的固相萃取是一次性使用的試劑盒，其中裝有50～500rag
固相吸附顆粒，被固定在兩聚乙烯塊之間，
還有一種新的特異性結(jié)合方法涉及三股螺旋親和捕獲技術(shù)。三
股螺旋已被證明是一種DNA尋靶的有效方法，這項技術(shù)最初在生產(chǎn)
基因治療階段質(zhì)粒時發(fā)展起來，可以使基岡產(chǎn)物量按比例增大。這
種方法同樣適用于較小規(guī)模的高通量分析系統(tǒng)。這項技術(shù)用到了一
種結(jié)合了小的寡核苷酸片段的親和性基質(zhì)，這些片段通過氫鍵與雙
鏈DNA上雙螺旋大凹槽上特定區(qū)域相結(jié)合，基于嘧啶寡核苷酸與DNA
雙鏈上的嘌呤特異性結(jié)合，形成局部的三重螺旋結(jié)構(gòu)。與DNA雙螺
旋大凹槽結(jié)合的嘧啶寡核苷酸平行于雙鏈DNA上的嘌呤，這是通過
兩者之間胡思坦氫鍵實現(xiàn)的。基質(zhì)的結(jié)合特性可通過改變洗脫緩沖
液或化學(xué)修飾來改變，三股螺旋捕獲技術(shù)已經(jīng)用于重組DNA的富集
和篩選以及從溶菌產(chǎn)物中分離PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒DNA。
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