本文標(biāo)題："用于PCR反應(yīng)的測試檢測用便攜光學(xué)顯微鏡"
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用于PCR反應(yīng)的測試檢測用便攜光學(xué)顯微鏡
沉淀DNA的另一種方法是CTAB法。加1／]0體積的5％CTAB，在冰上放置
20分鐘，DNA／CTAB在4~C 3000g下離心，去掉上清液，再用70％的乙醇和2
00mM醋酸鈉((pH6．0)溶解CTAB，溶液]0000g下離心20分鐘，重復(fù)上述抽提
過程兩次，然后用70％的乙醇沖洗去掉鹽分。沉淀經(jīng)過干燥(5分鐘)，溶于
1／10XⅧ緩沖液中(Murray&Thompson，1990)。必須注意的是，這些技術(shù)不
可能去除所有的雜質(zhì)，并且可能導(dǎo)致DNA丟失。建議研究者通過擴(kuò)增反應(yīng)判
斷DNA擴(kuò)增是否被抑制以判斷是否有必要進(jìn)行第二次純化過程。29．2 PCR
擴(kuò)土曾和DNA序歹Q測定
進(jìn)行基因片段的擴(kuò)增反應(yīng)時，古DNA會呈現(xiàn)出特殊的問題，主要由于抑
制因子的存在和DNA模板的片段性(Golenberg，1991，1993)。除了這些限
制外，非常低的DNA濃度，引物的不協(xié)調(diào)性，非最佳的溫度條件和時間設(shè)置
等，能經(jīng)常導(dǎo)致陰性擴(kuò)增結(jié)果。盡管陰性擴(kuò)增結(jié)果常常與缺少內(nèi)源DNA的結(jié)
果一致，但決不能表明樣品中沒有DNA存在。因此，在定論提取物中完全沒
有DNA之前，必須進(jìn)行仔細(xì)的檢驗。抑制因子可以通過在陽性控制體系中加
一些用于PCR反應(yīng)的測試抽提液來檢測，在陽性控制反應(yīng)體系中反應(yīng)產(chǎn)物是
否存在可以反映抑制效應(yīng)存在與否，部分抑制物的存在會降低產(chǎn)物的量。
另外，由于樣品中高度片段化的DNA，在擴(kuò)增反應(yīng)中重疊的片段充當(dāng)引物在
延伸過程中消耗dNTPs和酶的量，這種酶促反應(yīng)將部分重建破損模板，從而
與目標(biāo)PCR反應(yīng)競爭而降低目標(biāo)PCR的效率，導(dǎo)致低產(chǎn)量的特異PCR產(chǎn)物(
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